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卡拉胶十一糖对小鼠单核/巨噬细胞的免疫调节

  卡拉胶十一糖对小鼠单核/巨噬细胞的免疫调节效应研究

  

  目的:海藻多糖是海藻的重要活性物质之一,卡拉胶便是来源于红藻的硫酸多糖,广泛应用于食品、化工及医药等领域,其来源丰富、具多种生物活性。

  

  研究发现,将卡拉胶降解后,可使得其多糖链断裂、活性基团暴露,从而使其活性提高,且具有溶解性强、易于吸收等特点,因此卡拉胶寡糖的研究是今后卡拉胶发展的重要方向。

  

  目前对卡拉胶及其寡糖的研究,集中于寡糖的制备及对降解得到的混合寡糖进行活性分析,而卡拉胶寡糖的生物活性与其类型、分子量以及硫酸基团含量等密切相关,因此使用类型明确,结构确定,分子量均一的卡拉胶寡糖进行研究,探讨卡拉胶寡糖生物活性与其结构的关系,是实现其活性开发的必要条件。

  

  方法:采用MTT比色法从三种结构明确的κ-卡拉胶寡糖(卡拉胶三糖、十一糖及十九糖)中筛选出对小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7促增殖作用最强的种类。

  

  进而通过MTT法、LDH总量及释放量的检测、ATP水平的测定及细胞生长曲线的绘制,观察卡拉胶十一糖对细胞生长状态的影响,并确定其最佳作用条件。

  

  采用一般形态学观察、中性红及墨汁吞噬实验、Griess法及荧光法、酶联免疫吸附实验(ELISA)研究RAW264.7细胞对卡拉胶十一糖的免疫响应作用,再通过TLR4封阻实验及荧光法对其响应机制进行初步探究。

  

  结果:三种K-卡拉胶寡糖中促增殖能力最强的为卡拉胶十一糖,并发现其可促进细胞增殖,并对细胞膜完整性、细胞活性以及细胞增殖能力有促进作用,且观察到100 μg/mL,24 h为最佳作用条件。

  

  在此条件下,探究RAW264.7细胞对卡拉胶十一糖的免疫响应作用,结果显示,处理组细胞的形态圆润,状态良好,体积增大,对墨汁及中性红的吞噬能力增强,NO含量及一氧化氮合成酶(NOS)活性提高,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量增多。

  

  同时,使用TLR4特异性抑制剂可显著降低由卡拉胶十一糖引起的TNF-α分泌量增加,且卡拉胶十一糖作用后,可使RAW264.7细胞的TLR4表达量增加,NF-κB的主要亚基P65发生核转移。

  

  结论:从三种卡拉胶寡糖中筛选出对RAW264.7细胞促增殖能力最强的寡糖——卡拉胶十一糖;同时发现,卡拉胶十一糖不仅可促进细胞增殖,还可提高细胞活力及增殖能力,且可引起RAW264.7的免疫应答反应,使细胞激活,并提高细胞的吞噬能力、NO产生能力以及TNF-α分泌量;同时初步推测RAW264.7细胞对卡拉胶十一糖的免疫应答是通过TLR4-NF-κB通路。

  

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