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人脂肪干细胞治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎机制人脂肪干细胞治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎机制的探讨
目的观察人脂肪干细胞(human Adipose Derived Stem Cells,h ADSCs)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(Experimental Autoimmune Uveitis,EAU)的治疗效果,初步探讨其对EAU大鼠T细胞亚群及其细胞因子的影响。
方法1.取抽脂手术腹壁脂肪行人脂肪干细胞贴壁培养,流式细胞术表型鉴定,成脂、成骨诱导实验鉴定。
2.视网膜S抗原与完全弗氏佐剂混合,于第1天,第7天行足垫下注射制备EAU模型。
第12天、13天、14天行ADSCs鼠尾静脉注射,对照组行PBS注射,空白组不予处理,第15天处死大鼠。
3.免疫后观察大鼠眼部临床表现,按Caspi标准评分。
4.处死后取眼球制备HE切片、同时行免疫组化法观察IFN-γ和IL-17表达情况。
5.处死后取脾脏单个核细胞检测各组Th1、Th17、Treg细胞比例。
结果1.成功分离培养h ADSCs,呈贴壁生长,具有相应免疫表型,能成脂、成骨分化。
2.成功制备EAU模型,临床评分显示第9天起病,12天达峰,之后逐渐恢复。
h ADSCs实验组相同时间临床评分明显降低(P<0.05)。
3.第15天,观察大鼠HE组织学切片示:模型对照组视网膜结构破坏明显,排列紊乱,炎症细胞浸润。
h ADSCs实验组评分较对照组明显降低(P<0.05)。
4.IFN-γ、IL-17免疫组化结果:h ADSCs实验组较对照组表达明显降低(P<0.05)。
5.脾脏单个核细胞流式细胞术结果:对照组Th1、Th17、Treg比例较空白组均增高(Th1:15.98±2.39、Th17:12.33±0.622、Treg:2.79±0.14,P<0.05),h ADSCs组调节Th1、Th17细胞比例减少(Th1:4.11±0.34、Th17:4.34±0.39P<0.05),使Treg细胞比例增加(4.79±0.12,P<0.05)。
结论hADSCs可以有效治疗EAU,可能通过抑制Th1、Th17分化,减少其细胞因子IFN-γ、IL-17分泌,促进Treg细胞分化从而减缓疾病的发生发展。
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