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立氟胺联合白芍总苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

  

  

  目的:研究特立氟胺(Teriflunomide,TIF)联合白芍总苷(Total glucosides of paeony,TGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠脾组织中Th17细胞、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)比例及细胞因子IL-17、IL-10的影响,探讨联合用药对EAE小鼠的治疗作用,为临床多发性硬化的药物联合治疗提供理论依据。

  

  方法:选取75只8-10周龄的雌性C57BL/6小鼠(体重18g-20g),随机分为5组:Control组、EAE组、TIF组、TGP组和TIF+TGP组,每组15只。

  

  以MOG35-55为抗原,辅以完全弗氏佐剂、结核菌素及百日咳毒素,建立小鼠EAE模型,Control组不予免疫。

  

  免疫当天记为第0天,自免疫第1天开始给药,TIF组小鼠给予TIF15mg/kg每日灌胃,TGP组小鼠给予TGP500mg/kg每日灌胃,TIF+TGP组小鼠给予TIF15mg/kg+TGP500mg/kg每日灌胃,Control组和EAE组小鼠给予等量的溶剂每日灌胃。

  

  自免疫第1天起,每日早晚2次由两名观察者分别观察小鼠的发病情况并记录体重变化及神经功能评分(采用Weaver15分法)。

  

  于免疫后第26天处死各组小鼠。

  

  无菌条件下取出小鼠脾组织制备脾细胞进行培养,利用流式细胞学技术测定各组小鼠Th17及Treg细胞比例。

  

  利用实时定量PCR方法检测小鼠脾组织细胞因子IL-17、IL-10的m RNA表达水平。

  

  利用ELISA法检测小鼠脾细胞培养液上清液中IL-17、IL-10的表达水平。

  

  结果:1各组小鼠发病情况:发病率方面,Control组无发病,EAE组、TIF组、TGP组小鼠之间无明显差别(P>0.05),TIF+TGP组同EAE组、TIF组、TGP组相比显著降低(P<0.05);神经功能评分方面,TIF组、TGP组、TIF+TGP组小鼠均显著低于EAE组(P<0.05),TIF+TGP组显著低于TIF组、TGP组(P<0.05),TIF组与TGP组无明显差别(P>0.05)。

  

  2各组小鼠Th17及Treg细胞比例:同Control组相比,EAE组小鼠Th17细胞比例显著升高(P<0.05),Treg细胞比例显著降低(P<0.05);同EAE组相比,TIF组、TGP组、TIF+TGP组小鼠Th17细胞比例显著降低(P<0.05),TGP组、TIF+TGP组小鼠Treg细胞比例显著升高(P<0.05),TIF组小鼠Treg细胞比例无明显差别(P>0.05);同TIF组、TGP组相比,TIF+TGP组小鼠Th17细胞比例显著降低(P<0.05),Treg细胞比例显著升高(P<0.05);TIF组与TGP组小鼠各细胞比例无明显差别(P>0.05)。

  

  3各组小鼠IL-17、IL-10 m RNA表达水平:同Control组相比,EAE组小鼠IL-17 m RNA水平显著升高(P<0.05),IL-10 m RNA水平显著降低(P<0.05);同EAE组相比,TIF组、TGP组、TIF+TGP组小鼠IL-17m RNA水平显著降低(P<0.05),IL-10 m RNA水平显著升高(P<0.05);同TIF组、TGP组相比,TIF+TGP组小鼠IL-17 m RNA水平显著降低(P<0.05),IL-10 m RNA水平显著升高(P<0.05);TIF组与TGP组小鼠IL-17、IL-10m RNA水平无明显差别(P>0.05)。

  

  4各组小鼠脾细胞培养液上清液中IL-17、IL-10浓度:同Control组相比,EAE组小鼠IL-17浓度显著升高(P<0.05),IL-10浓度显著降低(P<0.05);同EAE组相比,TIF组、TGP组、TIF+TGP组小鼠IL-17浓度显著降低(P<0.05),IL-10浓度显著升高(P<0.05);同TIF组、TGP组相比,TIF+TGP组小鼠IL-17浓度显著降低(P<0.05),IL-10浓度显著升高(P<0.05);TIF组与TGP组小鼠IL-17、IL-10浓度无明显差别(P>0.05)。

  

  结论:1特立氟胺、白芍总苷可以减轻EAE小鼠神经功能损伤的严重程度,两者联合效果更明显且能显著降低发病率。

  

  2特立氟胺、白芍总苷可以降低EAE小鼠Th17细胞比例及IL-17m RNA与蛋白表达水平,特立氟胺可以升高IL-10 m RNA与蛋白表达水平,白芍总苷可以升高Treg细胞比例及IL-10 m RNA与蛋白表达水平,两者联合治疗效果更明显。

  

  3特立氟胺联合白芍总苷可能通过调节Th17/Treg细胞平衡从而对EAE小鼠发挥保护作用。


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