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 沙地云杉体细胞胚胎发生及组织细胞学观察

 

  

  本试验分别以沙地云杉未成熟合子胚与成熟合子胚为外植体,研究不同基本培养基、不同激素组合,不同株系对胚性愈伤诱导、增殖以及体胚分化成熟的影响,建立并优化了沙地云杉体细胞胚胎发生体系,结果表明:1.沙地云杉胚性愈伤组织的诱导:以未成熟合子胚为外植体诱导胚性愈伤组织最适诱导条件包括:最佳的激素组合为添加6-BA 1.2~1.8 mg/L、2,4-D 1.8~2.7 mg/L,胚性愈伤组织诱导率最高可达74.00%;最佳采集日期为8月5日前后,胚性愈伤组织诱导率最高为67.70%;不同株系胚性愈伤组织诱导率最低为15.91%,最高可达77.50%,且诱导率与其饱籽率呈显著正相关(r=0.865,P=0.006)关系;以成熟合子胚为外植体诱导胚性愈伤组织的培养条件为:初代培养采用LM +6-BA 2.0 mg/L + KT 1.0 mg/L + 2,4-D 4.0 mg/L,继代培养采用 1/2LM + 6-BA 1.0 mg/L + KT 0.5 mg/L + 2,4-D 2 mg/L,胚性愈伤组织诱导率为12.00%,其它处理没能诱导产生胚性愈伤组织。

  

  2.胚性愈伤组织增殖最佳激素组合为添加6-BA 0.8 mg/L、2,4-D 0.8~1.6 mg/L,在愈伤组织增殖过程中,2,4-D的作用更明显,最高增殖率为7.24倍。

  

  3.沙地云杉体细胞胚胎分化与成熟最适培养条件为:1/2LM+ABA 22.5mg/L +PEG4000 45 g/L,体胚分化数最高为362个/g,畸形胚数为108个/g,畸形胚率为29.83%。

  

  K-81株系体胚分化数最高为573.4个/g,其中畸形胚数为151个/g,畸形胚率为26.33%。

  

  4.沙地云杉体细胞胚胎发生发育过程组织细胞学观察表明:胚性愈伤组织是由椭圆形或长条形的胚性细胞以及由胚性细胞分裂所产生的胚性胚柄团组成;在愈伤组织成熟发育过程中,体细胞胚胎发育共经过早期原胚、球形胚,早期体胚及子叶胚四个阶段。


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