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CD20+B细胞淋巴瘤细胞IDO/Kyn/AHR信号通路表达的研究

  

  

  目的:弥漫大B细胞淋巴瘤在所有非霍奇金淋巴瘤中最为常见,是一组高度异质性和高增殖活性的恶性肿瘤,其标准化疗方案使约50%患者疾病完全缓解。

  

  利妥昔单抗的运用使DLBCL的治疗进入了一个全新的时代,患者疾病完全缓解率和总生存率得到进一步的提高,但是仍有约40%患者疾病进展复发。

  

  随着我们更深入的研究肿瘤发生发展机制,我们发现肿瘤的发生发展可能与参与免疫逃逸的某些基因异常表达相关,深入的认识这些基因的异常表达对抗肿瘤免疫系统的具体作用过程,并有针对性的阻断导致免疫逃逸的关键通路,是提高肿瘤治疗效果的重要方法。

  

  IDO是色氨酸代谢途径中的关键酶,IDO的高表达和活性增高与免疫逃逸密切相关,IDO亦是肿瘤免疫治疗中的热点。

  

  IDO高表达于多种人类实体肿瘤和血液淋巴系统肿瘤。

  

  在淋巴瘤中,亦有多项研究证实IDO高表达于DLBCL患者的肿瘤细胞中,IDO高表达与预后不良相关。

  

  在本团队的前期实验中,证实了利妥昔单抗耐药的其中一个作用机制即为DLBCL细胞中的IDO高表达。

  

  诸多报道IDO/Kyn/AHR信号通路参与免疫调节系统,IDO过表达,导致局部色氨酸消耗,代谢产物犬尿氨酸蓄积,AHR激活并发生核转位,靶基因转录表达,促使Treg细胞分化增殖,抑制效应T细胞增殖活化,导致免疫逃逸。

  

  但IDO是否通过启动IDO/Kyn/AHR通路,导致肿瘤免疫逃逸,还有待进一步研究证实。

  

  本研究旨在通过1-MT、CH223919分别抑制Raji细胞和JeKo-1细胞中IDO、AHR的表达,来观察IDO/Kyn/AHR信号通路中各个信号分子的表达情况。

  

  方法:1、体外培养raji和jeko-1细胞系,应用荧光定量pcr方法检测idomrna和ahrmrna的相对表达水平,以及使用ido抑制剂(1-mt)或者ahr抑制剂(ch223191)以不同浓度不同时间作用细胞后后,检测idomrna和ahrmrna相对表达水平的变化;2、1-mt或ch223191以不同浓度作用raji细胞和jeko-1细胞24h后,收集细胞上清,比色法分别检测细胞上清中色氨酸和犬尿氨酸的含量。

  

  结果:1、荧光定量pcr结果显示:(1)1-mt5,25μm/l分别作用于raji细胞和jeko-1细胞0.5h、1h、2h后,测得idomrna和ahrmrna相对表达量下降,并随着1-mt浓度的增加及作用时间的延长,idomrna、ahrmrna相对表达水平逐渐下降,以1-mt浓度组25μmol/l浓度及作用2h时下降最明显(p<0.05)。

  

  但1-mt作用于jeko-1细胞0.5h后,5μmol/l浓度组和25μmol/l浓度组间虽然idomrna表达水平逐渐下降,但差异无统计学意义(p>0.05)。

  

  (2)ch2231915,25μm/l作用于raji细胞和jeko-1细胞0.5h、1h、2h后,测得idomrna和ahrmrna相对表达量下降,随着ch223191浓度的增加或作用时间的增加,idomrna和ahrmrna相对表达量水平下降更为明显,以25μmol/l浓度或作用2h时最明显(p<0.05)。

  

  但ch2231915μm/l作用于jeko-1细胞后,0.5h组和1h组间idomrna表达水平虽然逐渐下降,但差异无统计学意义(p>0.05)。

  

  (3)1-mt和ch223191分别作用于raji细胞和jeko-1细胞后,随着浓度增加或作用时间延长,idomrna和ahrmrna相对表达量均下降,行相关性分析显示二者存在极强正相关关系(r>0.8,p<0.05)。

  

  2、细胞上清犬尿氨酸、色氨酸含量测定:1-mt(5,25μm/l)和ch223191(5,25μm/l)分别作用于raji细胞及jeko-1细胞24h后,测得细胞上清中色氨酸含量增加,犬尿氨酸含量降低,并随着1-MT和CH223191浓度的增加,色氨酸浓度增加更明显,犬尿氨酸浓度降低更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。

  

  结论:1.B细胞淋巴瘤细胞存在IDO/Kyn/AHR信号通路的表达和活化;2.利用IDO或AHR抑制剂可阻断B细胞淋巴瘤细胞中的IDO/Kyn/AHR信号回路。


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