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不同治法方药对流感病毒感染小鼠免疫细胞RLH信号通路的影响

  不同治法方药对流感病毒感染小鼠免疫细胞RLH信号通路的影响


  研究抗流感病毒药物奥司他韦、单体小檗碱与三种中药复方新加香薷饮、桂枝麻黄各半汤、银翘散对甲型流感病毒(FM1株)感染小鼠肺部免疫细胞中RLH信号通路的影响,探讨不同治法抗病毒作用的机制。


  为今后研发相关的抗流感病毒药物提供理论依据。


  方法:1.扩增甲型流感病毒(FM1株),测定病毒的LD50。


  建立RIG-I-/-小鼠和正常野生型C57BL/6小鼠的流感模型;2.分别予以奥司他韦、单体小檗碱以及三种中药复方进行灌胃,每日观察记录小鼠的一般状况、死亡率、体重等;3.于病毒感染后的第7天,进行取材。


  检测各组小鼠肺指数变化,分析各组小鼠的生存率,做小鼠肺组织的病理切片;4.通过流式细胞术检测正常野生型C57BL/6小鼠Th1/Th2、Th17/Treg的比例;5.通过RT-PCR法和Western-blot方法检测正常野生型C57BL/6小鼠小鼠肺部免疫细胞RLH信号通路中RIG-I、NF-κB和MAVS在基因水平上和蛋白水平上的表达。


  结果:1.成功通过鸡胚尿囊腔接种法获得甲型流感病毒(FM1株)悬液;测得FM1流感病毒对于正常野生型C57BL/6小鼠的半数致死量为LD50=2-2.83/50μl;2.奥司他韦、小檗碱和桂枝麻黄各半汤可以提高正常野生型C57BL/6流感小鼠的生存率,降低肺指数,减轻肺部炎症;奥司他韦和桂枝麻黄各半汤对于RIG-I-/-流感小鼠同样有效;新加香薷饮和银翘散的影响不明显;3.流感病毒的感染可以上调小鼠体内Th1/Th2和Th17/Treg的比例,奥司他韦、桂枝麻黄各半汤、小檗碱可显著下调Th1/Th2和Th17/Treg的比例。


  4.流感病毒的感染可以上调RLH信号通路中相关因子RIG-I、MAVS和NF-κB的表达,奥司他韦、小檗碱可显著下调它们的表达。


  结论:流感病毒感染可以激活小鼠体内的免疫反应,活化小鼠肺部免疫细胞中RLH信号传导通路,引起肺部炎症,导致肺指数上升,并且上调Th1/Th2和Th17/Treg的比例。


  奥司他韦、小檗碱和桂枝麻黄各半汤治疗后,可有效下调正常野生型C57BL/6流感小鼠各项指标,发挥抗流感病毒作用。


  小檗碱可能通过影响RLH信号传导通路的活化来发挥抗流感病毒作用。


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