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Notch信号通路相关微小RNA在胶原诱导的关节炎小鼠免疫细胞

  Notch信号通路相关微小RNA在胶原诱导的关节炎小鼠免疫细胞中的表达


  类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种系统性自身免疫性疾病,其特征是手、足小关节的对称性、多关节性、侵袭性关节炎症,常伴有滑膜组织异常增生,最终导致关节、软骨破坏。


  其发病机制复杂,受到环境、感染、遗传等多重因素影响。


  近年来,大量研究表明,微小RNA(microRNA,miRNA)在RA患者和胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠动物模型中存在差异性表达。


  本课题组前期研究发现,Notch信号途径可通过调节辅助性T细胞功能性分化参与RA的发生、发展。


  本研究旨在通过检测CIA小鼠外周血、脾脏及淋巴结T细胞中Notch信号通路相关的miRNA分子,筛选出具有差异性表达的miRNA分子,分析miRNA分子的差异性表达与Notch信号途径调控辅助性T细胞功能性分化的相关性,为发展以RNA干扰为手段的RA治疗策略奠定基础。


  方法:(1)使用牛II型胶原和佐剂对DBA/1J小鼠进行免疫,构建胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠模型。


  (2)于造模第40天时取CIA小鼠外周血,采用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time fluorescent PCR,qRT-PCR)检测CIA小鼠及正常对照小鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中miR-1a-3p、miR-20a-5p、miR-23b-3p、miR-30b-5p、miR-30c-5p、miR-107-3p、miR-141-3p、miR-144-3p、miR-146a-5p、miR-150-5p、miR-199b-5p、miR-200b-3p、miR-200c-3p及miR-449a-5p的表达水平。


  (3)采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分选CIA小鼠和正常对照小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4~+T、CD8~+T细胞,采用qRT-PCR检测CD4~+T、CD8~+T细胞中miR-23b-3p、miR-30b-5p、miR-30c-5p及miR-200b-3p的表达水平。


  (4)应用GraphPad Prism 5.0软件进行作图和统计学分析,两组数据间比较采用t检验分析。


  结果:(1)与正常对照相比,CIA小鼠PBMC中miR-200b-3p、miR-30c-5p、miR-30b-5p及miR-23b-3p的表达水平均明显降低(P<0.05)。


  (2)与正常对照相比,CIA小鼠外周血CD4~+T细胞中miR-23b-3p的表达水平显著降低(P<0.05),miR-30c-5p、miR-30b-5p和miR-200b-3p差异并不显著(P>0.05);CIA小鼠外周血CD8~+T细胞中miR-23b-3p、miR-30b-5p、miR-30c-5p、miR-200b-3p的表达水平差异均不显著(P>0.05)。


  (3)与正常对照相比,CIA小鼠淋巴结CD4~+T细胞和CD8~+T细胞中miR-23b-3p、miR-30b-5p、miR-30c-5p、miR-200b-3p的表达水平均无明显差异(P>0.05)。


  (4)与正常对照相比,CIA小鼠脾脏CD4~+T细胞中miR-23b-3p的表达水平显著降低(P<0.05),miR-30b-5p、miR-30c-5p和miR-200b-3p的表达水平两者无明显差异(P>0.05);CIA小鼠脾脏CD8~+T细胞中miR-23b-3p、miR-30b-5p、miR-30c-5p、miR-200b-3p的表达水平无明显差异(P>0.05)。


  结论:(1)CIA小鼠PBMC中miR-200b-3p、miR-30c-5p、miR-30b-5p及miR-23b-3p的表达水平均明显低于正常对照小鼠(P<0.05),提示这四种miRNA可能在CIA发病过程中发挥作用。


  (2)与正常对照小鼠相比,CIA小鼠PBMC中miR-23b-3p明显降低(P<0.05),CIA小鼠脾脏CD4~+T细胞中miR-23b-3p的表达水平显著降低(P<0.05),提示外周血CD4~+T细胞中的miR-23b-3p可能来源于脾脏。


  (3)miR-23b-3p在CIA小鼠PBMC和脾脏CD4~+T中均明显降低(P<0.05),提示miR-23b-3p可能通过Notch信号通路免疫调控CIA小鼠T细胞。


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