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自身免疫性甲状腺炎免疫细胞中的作用及其机制

  NLRP3炎症小体在自身免疫性甲状腺炎免疫细胞中的作用及其机制研究


  自身免疫性甲状腺炎(Autoimmune thyroiditis,AIT)作为临床甲减的主要病因,是一种常见的器官特异性自身免疫病。


  其明确病因虽未完全清楚解释,但目前认为是遗传、环境等多因素共同作用所致的免疫稳态失衡。


  由胞浆内模式识别受体及其组分组装而成的高分子蛋白复合体被称为炎症小体,有相关研究报道炎症小体参与激活T细胞等过程,NLRP3是目前研究最多的炎症小体,NLRP3炎症小体在AIT的发病中起作用已被本课题组证实。


  那么,碘是AIT发病的重要环境因素之一,AIT经典动物模型NOD.H-2h4小鼠也证实碘是诱发和加重AIT的必要条件,但碘过量是否影响NLRP3炎症小体分泌尚未见报道。


  本文旨在AIT患者外周血培养的PBMC原代细胞中探讨碘对NLRP3炎症小体的作用以及对辅助性T细胞分化的影响,以及观察与炎症小体激活有关的唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-1(Si glec-1)在自身免疫甲状腺炎患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达水平,分析其与AIT炎症反应指标的相关性;并进一步在培养的PBMC原代细胞中探讨siglec1激活对调节辅助性T细胞分化、促进炎症反应的作用。


  方法:本研究收集30例甲功正常的AIT患者、30例年龄及性别匹配的健康对照者的外周全血和血清,体外培养AIT患者和正常对照组PBMC,单独应用脂多糖(LPS)或与不同浓度的碘化钠共同刺激72h。


  rt-PCR、WB检测各组PBMC中NLRP3、ASC、caspase1的水平,流式细胞术检测各组CD14+单核细胞中NLRP3及Th1细胞比例(%)、Th17细胞(%)比例变化。


  Elisa检测血清可溶性Siglec-1(sSiglec-1)水平,rt-PCR、WB检测各组PBMC中Siglec-1的水平,流式细胞术检测各组CD14+单核细胞中Siglec-1水平及Th1细胞比例(%)、Th17细胞比例(%);体外培养AIT患者和正常对照组PBMC,单独应用脂多糖(LPS)或与不同浓度的碘化钠共同刺激72h,流式细胞术检测各组CD14+单核细胞中Siglec-1水平及Th1细胞比例(%)、Th17细胞(%)比例变化。


  结果:原代培养PBMC 72小时,5 x 10-5mmol/L到1 x 10-2mmol/L浓度的碘化钠上调正常人及AIT患者PBMC中NLRP3、ASC、caspase1、caspase1p20表达(P<0.05)。


  经碘化钠刺激后,无论正常人还是AIT患者CD14+单核细胞中NLRP3(%)均升高(P<0.05),AIT患者Th1细胞比例(%)和Th17细胞比例(%)升高(P<0.01),并呈碘浓度依赖性,正常对照中无显著性差异(P>0.05)。


  AIT患者血清sSiglec-1、PBMC中Siglec-1 mRNA表达及蛋白水平均显著高于正常对照组(P<0.01);CD14+单核细胞上Siglec-1水平显著高于正常对照组(P<0.01);Th1细胞比例(%)、Th17细胞比例(%)显著高于正常对照组(P<0.001)。


  原代培养PBMC 72小时,5 x 10-5mmol/L到1 x 10-2mmol/L浓度的碘化钠上调正常人及AIT患者PBMC中siglec-1表达(P<0.001)。


  AIT患者Th1细胞比例(%)和Th17细胞比例(%)升高(P<0.01),并呈浓度依赖性,正常对照中无显著性差异(P>0.05)。


  结论:NLRP3炎症小体及与之激活可能相关的Siglec-1在PBMC和单核细胞中的表达有可能作为AIT的生物标志;碘可能通过激活AIT患者NLRP3炎症小体及Siglec-1并影响Th1细胞和Th17细胞分化来调节AIT的免疫炎症反应。


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