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GSK3β调控EZH2影响乳腺癌干细胞的机制研究

  GSK3β调控EZH2影响乳腺癌干细胞的机制研究


  目的:我们前期研究发现糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase-3,GSK3β)活性可以调控乳腺癌干细胞的扩增,并且该作用部分依赖于EZH2。


  但GSK3β如何调控EZH2具体机制不清。


  本研究旨在探讨GSK3β如何调控EZH2的具体分子机制。


  方法:1、分别利用慢病毒载体感染乳腺癌细胞,建立稳定高表达EZH2及持续激活型和激酶失活型的GSK-3β的细胞系,并在高表达EZH2的细胞中再转入GSK3β-KD、GSK3β-CA质粒,通过悬浮成球实验,检测各组成球比例。


  2、利用Western blot技术,检测乳腺癌细胞系中GSK3β的活性是否可以影响EZH2的蛋白表达。


  3、利用免疫共沉淀技术检测GSK3β是否能与EZH2结合。


  4、检测GSK3β是否能够增加EZH2的泛素化水平,从而减弱其蛋白稳定性。


  结果:1、GSK3β的活性可以抑制乳腺癌干细胞扩增,并且部分依赖于EZH2的表达发挥作用。


  2、GSK3β可以抑制EZH2的表达。


  3、GSK3β通过与EZH2的直接结合,促进EZH2的泛素化水平,从而减弱其EZH2蛋白的稳定性。


  结论:GSK3β通过与EZH2的直接结合,促进EZH2的泛素化水平,进一步减弱EZH2蛋白的稳定性。