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Bregs调控舌鳞状细胞癌微环境中免疫抑制作用的研究

  Bregs调控舌鳞状细胞癌微环境中免疫抑制作用的研究


  第一章t Bregs对TSCC微环境中的作用第一节Bregs在TSCC微环境中表达与临床病理和生存率的关系目的:明确Bregs在TSCC微环境中的分布、表达及与临床病理和生存率的关系。


  方法:1.t取TSCC组织,癌旁组织,转移淋巴结和正常淋巴结的石蜡组织切片,免疫组化双染标记Bregs(CD19+IL10+)。


  2.t卡方检验验证Bregs和临床病理的关系,Kaplan–Meier法描绘生存曲线,log-rank检验检测生成曲线差异,Cox回归分析生存资料。


  结果:1.tBregs在TSCC(0.80±0.08%)中显著高于癌旁组织(0.52±0.04%p<0.01)。


  高表达Bregs预示着不良预后。


  2.tBregs在转移淋巴结(0.81±0.08%)中显著高于正常淋巴结(0.26±0.04%p<0.001).3.tBregs的表达与临床分期,局部复发和颈部淋巴结复发相关。


  (p<0.05).结论:TSCC微环境中Bregs细胞升高与临床分期及患者预后密切相关。


  第二节Bregs在TSCC微环境免疫抑制作用目的:通过体内外实验,探讨Bregs影响T细胞对肿瘤生长和转移的抑制作用。


  方法:1.t磁珠分选Bregs细胞,分为3组,去除Bregs组,正常B细胞组,增加Bregs组。


  2.t将各组B细胞与磁珠分选CD4+CD25-T细胞1:1混合,与肿瘤细胞共培养,CCK8检测细胞增殖,Transwells检测细胞的迁徙和侵袭。


  3.t裸鼠成瘤,将各组B细胞与磁珠分选CD4+CD25-T细胞1:1混合静脉注射裸鼠,PETCT检测肿瘤的增殖和转移。


  结果:1.tBregs减弱了T细胞对肿瘤增殖、迁徙和侵袭的抑制作用。


  2.tBregs减弱了T细胞对荷瘤裸鼠肿瘤生长和转移的抑制作用。


  结论:Bregs减弱了T细胞对肿瘤生长和转移的抑制作用。


  第二章t Bregs对TSCC微环境中Tregs/Th17平衡的影响目的:在TSCC免疫微环境中,探讨Bregs诱导Tregs/Th17的平衡改变、细胞因子分泌,从而减弱T细胞的抗肿瘤作用。


  方法:1.tTSCC石蜡包埋组织连续切片,免疫组化双染标记Tregs和Bregs。


  2.tSpearman相关性检验,验证Tregs和Bregs在TSCC微环境中数量分布相关性。


  3.t磁珠分选的B细胞与TSCC细胞系共培养72h,诱导Bregs细胞的产生,流式细胞仪检测Bregs生成量,ELISA检测上清液中IL-10和TGF-β的含量。


  4.t将含有Bregs的B细胞和对照组与磁珠分选的CD4+CD25-T细胞共培养48小时,流式检测Tregs的含量,ELISA检测上清液中IL10,IL17,IFN-γ和TGF-β的含量。


  5.t将含有Bregs的B细胞放入Transwells小室上室,与下室磁珠分选CD4+CD25-T细胞共培养48小时,流式检测Tregs的含量。


  6.t将抗IL10阻滞抗体加入含有Bregs的B细胞,与磁珠分选的CD4+CD25-T细胞共培养48小时,流式检测Tregs的含量。


  结果:1.tTregs/CD4+T细胞在TSCC含量(20.10±1.50%)显著高于癌旁组织(8.45±0.66%;p<0.001)。


  2.t转移淋巴结(metastatic lymph nodes MLN)中的Tregs(19.92±1.45%)较正常淋巴结(normal lymph nodes NLN)(5.13±0.56%;p<0.001)高。


  3.tSpearman相关性检验结果显示,Bregs和Tregs的分布呈相关性(p=0.02,rho=0.485).4.t流式细胞仪分析结果显示,与含有Bregs的B细胞共培养的T细胞中Tregs含量显著高于对照组(p<0.01).5.t加入抗IL10阻滞抗体或在Tran...


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