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羊驼胃肠道黏膜免疫相关细胞分布特征

  羊驼胃肠道黏膜免疫相关细胞分布特征及抗氧化功能的研究


  摘要:羊驼是我国新兴的养殖动物。


  原产自南美州安第斯山脉,适宜在低寒和高温(-20℃-30℃)的环境下生活,具有耐受恶劣环境和抗病力强的特征,羊驼全身都是宝,6000年前就成为当地人不可缺少的主要家畜。


  我国北方地区自然环境适合羊驼的养殖,引进这一物种可以产生可观的经济效益,是畜牧业养殖结构调整的理想物种。


  但饲养羊驼在我国还处于起步期,缺乏养殖羊驼的规范区及示范区、缺乏统一的管理体系,尤为重要的是羊驼常见病防控的统一技术标准有待完善。


  多种研究表明,反刍动物的胃肠疾病发生较频繁,胃肠黏膜免疫屏障更是机体免疫防御的第一道防线。


  目前关于羊驼胃肠道黏膜免疫屏障结构的研究尚不完全。


  因此,本试验选取不同性别的1-3岁华卡约羊驼和苏利羊驼,利用组织学、免疫组织化学、RT-PCR、qPCR和细胞培养等方法,探讨羊驼胃肠道黏膜屏障结构和免疫相关细胞的分布特征,以及血清抗氧化能力,为揭示羊驼胃肠道疾病的发生提供理论依据。


  研究结果如下:1.羊驼各室胃黏膜形态结构、肥大细胞(MCs)分布和黏蛋白Muc2 mRNA的表达特点:羊驼胃壁组织结构分为黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜层,其中无腺部上皮为复层扁平上皮,其余部分为单层柱状上皮。


  MCs主要分布在胃壁的黏膜层,第一室胃(C1)无腺部无MCs,第三室胃(C3)中MCs数量显著低于第二室胃(C2)88.89%(P=0.000)。


  羊驼各室胃Muc2 mRNA的表达在C2中最高,显著高出C1 88.79%(P=0.028)。


  2.羊驼小肠黏膜形态结构和黏膜免疫相关细胞分布特征:羊驼小肠分为十二指肠、空肠和回肠,小肠壁由黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜层构成。


  羊驼小肠绒毛高度、隐窝深度和V/C比值从十二指肠至回肠逐渐降低。


  上皮内淋巴细胞(IELs)和位于黏膜层的MCs从十二指肠至回肠逐渐减少。


  透射电镜结果显示空肠上皮细胞侧面连接方式主要是紧密连接,上皮细胞表面微绒毛排列整齐。


  小肠绒毛中杯状细胞(GCs)和MUC2阳性细胞数量从十二指肠至回肠逐渐升高,其中中性(PAS+亚型)GCs和双染(PAS+/AB+亚型)GCs从十二指肠至回肠先升高后降低,对酸性(AB+亚型)GCs进一步分型可知小肠中仅存在硫酸化亚型(Sul+亚型)GCs,从十二指肠至回肠逐渐增多。


  3.羊驼大肠黏膜形态结构和黏膜免疫相关细胞分布特征:大肠分为盲肠、结肠和直肠,大肠壁由黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜层构成。


  从盲肠至直肠GCs由圆形到长条形过度,细胞密度差异变化不显著(P>0.05),其中PAS+/AB+亚型GCs数量显著高于PAS+亚型和AB+亚型(P<0.05)GCs;对GCs进一步分型发现仅在结肠中观察到Sul+亚型、唾液酸亚型(Sia+亚型)和双染亚型(Sul+/Sia+亚型)的GCs,而盲肠和直肠中只有Sul+亚型GCs。


  同时大肠中MUC2以及Muc2 mRNA的表达从盲肠至直肠先减少后增多。


  4.ConA和LPS对下颌淋巴结、肠系膜淋巴结、脾脏和血液中T淋巴细胞增殖活性的影响:10μg/mL ConA和50μg/mL LPS刺激羊驼的下颌淋巴结、肠系膜淋巴结、脾脏和血液中的T、B淋巴细胞,均以肠系膜淋巴结中的T、B淋巴细胞增殖活性最高,显著高于其他淋巴组织11.96%-42.40%(P<0.05)。


  5.不同年龄与性别羊驼血清抗氧化能力的比较:雌雄性羊驼血清抗氧化水平在1-2岁期间随年龄的增长逐渐升高,其中相同年龄下,雌性羊驼血清的抗氧化酶活性(GSH-Px和SOD)和总抗氧化能力要显著高于雄性羊驼25%-67.91%(P<0.05),并具有较低的丙二醛(MDA)含量。


  结论:1-2岁羊驼血清抗氧化水平随年龄逐渐升高,同龄羊驼雌性比雄性具有更高的抗氧化水平,同时肠系膜淋巴结中T、B淋巴细胞增殖活性间接证明了羊驼胃肠道黏膜屏障结构及细胞对细菌和毒素的更强的清除能力。  


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