Rap1/NF-κB信号通路介导间充质干细胞对呼吸道变应性炎症的免疫调控

　　呼吸道变应性炎症包括变应性鼻炎及哮喘，全球的患病率正在逐渐攀升。

　　目前临床上常用的治疗手段均有明显局限性，而最近研究表明间充质干细胞（MSC）可以防治动物呼吸道变应性炎症。

　　我们课题组前期证明诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞（iPSC-MSC）可明显抑制小鼠呼吸道变应性炎症，但作用机制尚不清楚，在前期基础上拟进一步探讨介导(iPSC-)MSC对呼吸道变应性炎症发挥免疫调节作用的内部机制，力求从干细胞本身即细胞内部变化的角度阐明(iPSC)-MSCs具有免疫调节作用的分子机制，具有一定的理论意义。

　　端粒相关抑制和激活蛋白1（Rap1），最开始作为端粒结合蛋白的组成部分被发现，近年又发现其同时具有调节NF-κB信号通路活化的作用，而大量报道表明，NF-κB在MSC的存活、增殖、迁移及免疫调节功能中不可或缺。

　　因此，我们的实验目的是：1、利用Rap1基因敲除鼠及沉默iPSC-MSC中的Rap1基因明确Rap1是介导MSCs对呼吸道变应性炎症的免疫调节的关键因子；2、应用体内外变态反应模型，探讨Rap1在iPSC-MSC发挥免疫调节作用中的地位；3、探讨NF-κB在iPSC-MSCs发挥免疫调控作用中的地位及其与Rap1的关系；【方法】1.建立小鼠呼吸道变态反应炎症模型，比较野生鼠及Rap1基因敲除鼠来源的BM-MSC的防治效果；2.应用TNF-α及体外Th2炎症体系刺激iPSC-MSC，检测其中Rap1蛋白的表达；3.沉默iPSC-MSC中的Rap1基因，应用呼吸道变应性炎症小鼠模型和体外Th2炎症体系探讨Rap1在iPSC-MSC发挥免疫调节中的地位；4.对比体外Th2炎症体系刺激下沉默Rap1基因iPSC-MSC及对照细胞株中NF-κB通路的活化情况。

　　【结果】1.Rap1基因敲除鼠来源的BM-MSC对小鼠呼吸道变应模型的干预效果明显弱于野生鼠。

　　2.在TNF-α及体外Th2炎症体系刺激下，iPSC-MSC中Rap1蛋白的水平明显增高。

　　3.沉默Rap1基因的iPSC-MSC干预下，体外Th2炎症体系中IL-4、IL-13水平明显高于对照组。

　　4.沉默Rap1基因的iPSC-MSC对小鼠呼吸道变态反应模型的干预效果明显弱于对照组iPSC-MSC。

　　5.在体外Th2炎症体系刺激下，iPSC-MSC细胞核中NF-κB蛋白复合体亚基p65出现明显增高。

　　而同样Th2炎症体系刺激下沉默Rap1基因的iPSC-MSC细胞核内p65水平弱于对照组iPSC-MSC。

　　【结论】1.Rap1是BM-MSC发挥呼吸道变应性炎症免疫调节作用的关键因子。

　　2.Rap1也是iPSC-MSC发挥呼吸道变应性炎症免疫调节作用的关键因子。

　　3.Rap1介导iPSC-MSC的免疫调节作用可能是通过NF-κB实现的。

　　【关键词】呼吸道变应性炎症，BM-MSC，iPSC-MSC，Rap1，NF-κB